自身免疫病是一類由機體免疫系統異常活化攻擊自身組織引發的慢性疾病，包括類風濕關節炎（RA）、系統性紅斑狼瘡（SLE）、干燥綜合征（SS）等，其診斷與病情監測高度依賴自身抗體檢測。目前，酶聯免疫吸附試驗（ELISA）因特異性高、成本可控等優勢，成為自身抗體檢測的主流技術，而酶標儀作為ELISA的核心檢測設備，其光學性能、溫控精度及數據穩定性直接決定檢測結果的可靠性。

一、材料與方法

（一）實驗儀器

1、測試儀器：博清生物酶標儀。

2、對照儀器：某品牌酶標儀。

（二）實驗試劑與樣本

1、試劑：ANA、抗CCP、抗SSA、抗dsDNA ELISA 檢測試劑盒，試劑均在有效期內，嚴格按照說明書配制。

2、樣本：選取某風濕免疫科就診患者240例（RA100例、SLE80例、SS60例），均符合國際通用診斷標準；健康對照者100例，來自某體檢中心，排除自身免疫病及其他慢性疾病。所有樣本均采集靜脈血5mL，離心分離血清（3000r/min，10min），-20℃保存，避免反復凍融，檢測前室溫復融并充分混勻。

（三）實驗步驟

1、樣本處理：將所有血清樣本按照1:100稀釋（試劑盒推薦比例），每樣本設置3個復孔。

2、ELISA 操作：嚴格遵循試劑盒說明書，依次完成加樣（100μL/孔）、37℃孵育60min、洗滌液洗滌3次（300μL/孔，每次浸泡30s）、加酶標二抗（100μL/孔）、37℃孵育30 min、再次洗滌3次、加底物液（100μL/孔）、37℃避光顯色15 min、加終止液（50μL/孔）。

3、酶標儀檢測：分別使用博清生物酶標儀與對照儀器，在試劑盒推薦波長（ANA：450nm/630nm，抗CCP：450nm/630nm，抗 SSA：405nm/630nm，抗dsDNA：450nm/630nm）下檢測吸光度值（A值），記錄數據并通過儀器自帶軟件計算樣本濃度及陽性判定結果（以A值≥cut-off值為陽性）。

（四）性能評估指標

1、準確性：計算兩種儀器檢測同一批樣本（n=40）的A值相關性（Pearson相關系數），并以臨床診斷結果為金標準，計算兩種儀器的檢測符合率（符合率=（真陽性+真陰性）/總樣本數×100%）。

2、重復性：選取高、中、低3個濃度水平的質控樣本（各10份），分別進行批內檢測（同批次重復檢測10次）和批間檢測（連續10天檢測），計算CV值（CV=標準差/均值×100%）。

3、穩定性：連續30天檢測同一批質控樣本（n=5），觀察博清生物酶標儀A值的波動范圍，評估長期運行穩定性。

（五）統計學分析

采用軟件進行數據分析，計量資料以x±s表示，相關性分析采用Pearson檢驗，計數資料比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

二、結果

（一）準確性分析

博清生物酶標儀與對照儀器檢測4種自身抗體的A值均呈顯著正相關，相關系數r均大于0.96，且兩種儀器的陽性判定結果與臨床診斷的符合率無顯著差異（P>0.05），其中抗dsDNA檢測符合率最高（98.1%），抗SSA檢測符合率最低（95.3%），但均滿足臨床科研需求。

（二）重復性分析

博清生物酶標儀檢測4種自身抗體的批內CV為2.8%~4.2%，批間CV為3.5%~5.0%，均顯著低于臨床允許的CV<10% 標準，且與對照儀器的CV值無顯著差異（P>0.05），表明其重復性良好。

（三）穩定性分析

連續30天檢測結果顯示，博清生物酶標儀檢測高、中、低濃度質控樣本的A值波動范圍均小于5%，且無明顯漂移趨勢，表明其長期運行穩定性良好，可滿足連續科研實驗需求。

三、討論

自身抗體檢測的可靠性是自身免疫病科研與臨床診斷的核心前提，而酶標儀的性能是影響檢測結果的關鍵因素。本研究從準確性、重復性、穩定性三個核心維度，系統評估了博清生物酶標儀在自身抗體檢測中的應用價值，結果表明該儀器可達到主流進口儀器的檢測水平，具體優勢體現在以下三方面：

（一）準確性滿足科研與臨床需求

博清生物酶標儀與進口對照儀器的A值相關性系數均大于0.96，且與臨床診斷的符合率超過95%，這一結果得益于其采用的雙波長檢測技術——通過主波長檢測特異性信號，副波長（630nm）消除背景干擾（如血清濁度、孔壁污染），有效降低非特異性吸附帶來的誤差。此外，儀器的光學系統采用進口光柵，波長精度達±1nm，可精準匹配不同自身抗體ELISA試劑盒的推薦波長，進一步保證檢測準確性。

（二）重復性與穩定性支撐實驗可重復性

科研實驗對數據的可重復性要求極高，本研究中博清生物酶標儀的批內CV<4.5%、批間 CV<5.0%，且30天連續檢測無明顯漂移，這與其高精度溫控系統密切相關。該儀器采用底部加熱方式，孵育溫度控制精度達±0.1℃，可避免因溫度不均導致的酶促反應差異；同時，其8通道同步檢測設計可減少批次間操作誤差，為大樣本量科研實驗（如自身抗體流行病學調查）提供穩定的數據支撐。

（三）國產優勢助力科研成本優化

相較于進口酶標儀，博清生物酶標儀在價格上具有顯著優勢（約為進口儀器的1/2~2/3），且耗材兼容性強，可適配國內外主流ELISA試劑盒，無需依賴特定品牌耗材。此外，儀器配備的軟件支持數據自動導出、批量樣本分析及質控圖生成，可簡化科研數據處理流程，提高實驗效率。

本研究仍存在一定局限性：首先，樣本來源僅為單一中心，未來需通過多中心研究進一步驗證儀器的普適性；其次，本研究僅評估了4種常見自身抗體，后續可擴展至抗核小體抗體（AnuA）、抗磷脂抗體（aPL）等更多靶點，全面覆蓋自身免疫病檢測需求。博清生物博清生物科技（南京）有限公司研發的酶標儀在自身抗體檢測中表現出良好的準確性、重復性及穩定性，與主流進口酶標儀性能一致，且在成本控制與操作便捷性上具有顯著優勢。該儀器可滿足自身免疫病相關科研實驗及臨床檢測需求，為國產酶標儀在自身抗體檢測領域的應用提供了可靠證據，也為科研機構降低設備成本、提升實驗效率提供了新選擇。